Цзян
Чжунлян

Цель нашего исследования заключалась в изучении того, влияет ли снижение или сверхэкспрессия рецептора эстрогена β (ERβ) на пролиферацию клеток, стероидогенез, аутофагию и сигнальные пути в гранулёзных клетках яичника крупного рогатого скота in vitro. В данном исследовании гранулёзные клетки яичника крупного рогатого скота (ГККРС) культивировали и трансфицировали с использованием siRNA для ERβ (si-ERβ) или плазмиды с сверхэкспрессией ERβ (oe-ERβ). Для оценки пролиферации клеток использовали набор CCK-8. Количественная ПЦР в реальном времени применялась для измерения уровня транскрипции генов. Экспрессию белков определяли методом вестерн-блоттинга, а для оценки продукции стероидных гормонов использовали специализированный набор. Результаты показали, что уровень экспрессии ERβ влияет на пролиферацию ГККРС, что подтверждается изменениями уровней транскрипции генов FSHR, CYP19A1, HSD3β1 и STAR, а также продукцией эстрадиола (E2) и прогестерона (P4). ERβ был идентифицирован как важный ядерный рецептор, индуцирующий аутофагию ГККРС на основании уровней мРНК и белков, связанных с аутофагией. Дополнительно роль ERβ в аутофагии ГККРС была подтверждена обработкой клеток рапамицином (RAPA) или 3-метиладенином (3-MA) при сопутствующей трансфекции с si-ERβ или oe-ERβ. Данные по сигнальному пути AKT/mTOR и уровню его фосфорилирования свидетельствуют, что ERβ индуцирует аутофагию ГККРС путем подавления сигнального пути AKT/mTOR. В заключение, настоящее исследование демонстрирует, что снижение или сверхэкспрессия ERβ регулируют пролиферацию и функцию ГККРС и индуцируют аутофагию за счет воздействия на сигнальный путь AKT/mTOR. Полученные данные раскрывают новый механизм регуляции аутофагии посредством ERβ и предоставляют новые представления о роли аутофагии в гранулёзных клетках яичника.